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人神經肽YELISA試劑盒使用說明書

發布時間:2017-06-07 10:10:37 分類:行業新聞 來源: 點擊:次

人神經肽YELISA試劑盒使用說明書 人神經肽YELISA試劑盒使用說明書   預期利用  ELISA法定量測定人血清、血漿或其它相幹液體中神經肽γ(NP-γ)含量。  實驗原理  本試劑盒利用雙抗體夾心酶标免疫分析法測定标本中神經肽γ水平。用純化的抗體包被微孔闆,制成固相抗體,往包被抗體的微孔中順次加入神經肽γ、生物素化的抗人神經肽γ抗體、HRP标記的親和素,經過完全洗滌後用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終究的黃色。色彩的深淺和樣品中的神經肽γ呈正相幹。用酶标儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。  試劑盒組成及試劑配制  1. 酶聯闆:1塊(96孔)  2. 标準品(凍幹品):2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好後靜置10分鐘以上,然後反複

  預期利用

  ELISA法定量測定人血清、血漿或其它相幹液體中神經肽γ(NP-γ)含量。

  實驗原理

  本試劑盒利用雙抗體夾心酶标免疫分析法測定标本中神經肽γ水平。用純化的抗體包被微孔闆,扣件式腳手架實驗機制成固相抗體,往包被抗體的微孔中順次加入神經肽γ、生物素化的抗人神經肽γ抗體、HRP标記的親和素,經過完全洗滌後用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終究的黃色。色彩的深淺和樣品中的神經肽γ呈正相幹。用酶标儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。

  試劑盒組成及試劑配制

  1. 酶聯緊縮回彈實驗機闆:1塊(96孔)

  2. 标準品(凍幹品):2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好後靜置10分鐘以上,然後反複颠倒/搓動以助溶解,其濃度為50 ng/mL,做系列倍比稀釋後,分别稀釋成50 ng/mL ,25ng/mL,12.5ng/mL,6.25ng/mL,3.12ng/mL,1.56ng/mL,0.78ng/mL,其原液直接作為最高标準濃TYE50抗折抗壓實驗機度,樣品稀釋液直接作為标準濃度0 ng/mL,臨用前15分鐘内配制。

  如配制25ng/mL标準品:取0.5ml50 ng/mL的上述标準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻便可,其餘濃度以此類推。

  3. 樣品稀釋液:1×20ml/瓶。

  4. 檢測稀釋液A:1×10ml/瓶。

  5. 檢測稀釋液B:1×10ml/瓶。

  6. 檢測溶液A:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100ul),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如1ul檢測溶液A加99ul檢測稀釋液A的比例配制,輕輕混勻,在使用前1小時内配制。

  7. 檢測溶液B:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液B1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。

  8. 底物溶液:1×10ml/瓶。

  9. 濃洗滌液:1×30ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

  10. 終止液:1×10ml/瓶(2NH2SO4)。

  标本的收集及保存

  1.血清:标本請耐污漬實驗機于室溫放置2小時或4℃過夜後于1000 x g離心20分鐘,取上清便可檢測,或将标本放于⑵0℃保存,但應避免反複凍融。

  2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,标本收集後30分鐘内于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或将标本放于⑵0℃保存,但應避免反複凍融。

  注:标本溶血會影響最後檢測結果,因此溶血标本不宜進行此項檢測。

  操作步驟

  實驗開始前,請提早配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡可能避免起泡。每次檢測都應當做标準曲線。如樣品濃度太高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測範圍。

  1. 加樣:分别設空白孔、标準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100u紙箱抗破實驗機l,餘孔分别加标準品或待測樣品100ul,注意不要有氣手機觸摸屏耐劃格點擊實驗機泡,加樣将樣品加于酶标闆孔底部,盡可能不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶标闆加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。

  為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的标準品溶液。

  2. 棄去液體,甩幹,不用洗滌。微電腦環壓實驗機每孔加檢測溶液A工作液 100ul(取1ul檢測溶液A加99u電纜曲折實驗機l檢測稀釋液A的比例配制,輕輕混勻,脫圈輪胎實驗機在使用前1小時内配制),37℃,60分鐘。

  3. 溫育60分鐘後,棄去孔内液體,甩幹,洗闆3次,每次浸泡1⑵分鐘,350ul/每孔,甩幹。

  4全鋼輪胎均勻性實驗機. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100ul,37℃,60分鐘。

  5. 溫育60分鐘後,棄去孔内液體,甩幹,洗闆5次,每次浸泡電容器耐久性實驗機1⑵分鐘,350ul/每孔,甩幹。

  6. 依序每孔加底物溶液90ul,37℃避光顯色(30分鐘内,此時肉眼可見标準品的前3⑷孔有明顯的梯度蘭色,後3⑷孔梯度不明顯,便可終止)。

  7. 依序每孔加終止溶液50ul,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡可能與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準确性,底物反應時間到後應盡快加入終止液。

  8. 用酶聯儀在450nm波長依序丈量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液後15分鐘之内進行檢測。

  動态防水實驗機注:

  1. 每次實驗留1孔作為空白調零孔,該孔不加任何試劑,隻是最後加底物溶液及2NH2SO4。丈量時先用此孔調OD值至零。

  2.為避免樣品蒸發,實驗時将反應闆放于鋪有濕布的密閉盒内,酶标闆加上蓋或覆膜。

  3. 未使用完的酶标闆或試劑,請于2⑻℃保存。标準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請根據所需的量配置使用。請勿重複使用已稀釋過的标準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。

  4. 建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準确性。

  洗闆方法

  手工洗闆方法:吸去(不可觸及闆壁)或甩掉酶标闆内的液體;在實驗台上鋪墊幾層吸水

  紙,酶标闆朝下用力拍幾次;将推薦的洗滌緩沖液最少0.3ml注入孔内,浸泡1⑵分鐘,根據需

  要,重複此進程數次。

  自動洗闆:如果有自動洗闆機,應在熟練使用後再用到正式實驗進程中。

  特異性

  本編織袋拉力實驗機試劑盒可同時檢測重組或天然的人神經肽γ,且與其它相幹蛋白無交叉反應。

  計算

  以标準物的濃度為橫坐标(對數坐标),OD值為縱坐标(普通坐标),在半對數坐标紙上繪出标準曲線,根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用标準物的濃度與OD值計算出标準曲線的直線回歸方程式,将樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

  注意事項

  1. 洗滌進程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。

  2. 1次加樣時間最好控制在5分鐘内,如标本數量多,推薦使用排槍加樣。

  3. 請每次測定的同時做标準曲線,最好做複孔。

  4. 如标本中待測物資含量太高,請先稀釋後再測定,計算時請最後乘以稀釋倍數。

  5.在配制标準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不改性乳化瀝青實驗性能混淆。

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  6.底物請避光保存。

  檢測範圍:

  0.78 ng/mL ⑸0ng/mL

  說明

  1.試劑盒保存:⑵0℃(較長時間不用時);2⑻℃(頻繁使用時)。

  2.有效期:6個月

  3.濃洗滌液會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。

  4.剛開啟的酶聯闆孔中可能會含有少量水樣物資,此為正常現象,不會對實驗結果造成任何影響。

  5.中、英文說明書可能會有不1緻的地方,請以英文說明書為準。

人神經肽YELISA試劑盒使用說明書