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平闆細胞克隆形成試驗

發布時間:2017-06-07 10:11:35 分類:行業新聞 來源: 點擊:次

平闆細胞克隆形成試驗 平闆細胞克隆形成試驗 概念:細胞克隆構成率即細胞接種存活率,表示接種細胞後貼壁的細胞成活并構成克隆的數量。貼壁後的細胞不1定每一個都能增殖和構成克隆,而構成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞。克隆構成率反應細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。基本步驟:1、取對數生長時間的各組細胞,分别用0.25%胰蛋白酶消化并奏樂成單個細胞,并把細胞懸浮在10%胎牛血清的DMEM培養液中備用。2、将細胞懸液作梯度倍數稀釋,每組細胞分别以每皿50、100、200個細胞的梯度密度分别接種含10mL 37℃預溫培養液的皿中,并輕輕轉動,使細胞分散均勻。置37℃ 5% CO2及飽和濕度的細胞培養箱中培養2~3周。3、常常視察,當培養皿中出現肉眼可見的克隆時,終止培養。棄去上清液,用PBS謹慎浸洗2次。加4%多聚甲醛固定細胞5mL固定15分鐘。然後去固定 概念:
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4、将平皿颠倒并疊加1張帶網格的透明膠片,用肉眼直接計數克隆,或在顯微鏡(低倍鏡)計數大于10個細胞的克隆數。最後計算克隆構成率。
克隆鋼管水壓試驗機構成率 =(帶式輪胎試驗機克隆數/接種細健身器材綜合試驗機胞數)×100%
平闆克隆構成實驗方法簡單,适用于貼壁生長的細胞。适合底物為玻璃的、塑料瓶皿。實驗成功的關鍵是細胞懸液的制備數顯彈簧拉力試驗機和接種密度。細胞1定要分散得好,不能有細胞團,接種密度不能過大。